瓜類細菌性果斑病菌探針法熒光定量PCR試劑盒反應五要素：

參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特異性反應的關鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則：

①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。

②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。

③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結構，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。

⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)第二個堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性：引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。

引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。

 斯氏李斯特氏菌
 側孢短芽孢桿菌
 乳酸乳球菌乳亞種
 牙齦卟啉單胞菌
 菩提奇異球菌
 干燥棒桿菌
 屎腸球菌(屎鏈球菌)
 具核梭桿菌多形亞種
 脆弱擬桿菌
 齒雙歧桿菌
 粘性放線菌
 植物乳桿菌植物亞種
 遲緩愛德華氏菌
 哈氏弧菌
 Hydrotalea flava
 萎縮芽孢桿菌
 血鏈球菌
 醋酸醋桿菌
 伊氏李斯特氏菌
 英諾克李斯特氏菌
 紅曲霉
 不動桿菌
 食酸菌
 短波單胞菌
 多頭霉
 掘氏疫霉
 煙草疫霉
 副球菌
 溶藻細菌
 假單胞菌
 芽孢桿菌
 大腸桿菌
 酸土脂環(huán)芽孢桿菌