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DNA復(fù)制抑制因子抗體的生物素化標記實驗要點

發(fā)表時間:2022-05-05

DNA復(fù)制抑制因子抗體的生物素化標記實驗要點:
1.如在反應(yīng)混合液中有疊氮鈉或游離氨基存在,會抑制標記反應(yīng)。因此,蛋白質(zhì)在反應(yīng)前要對 0.1mol/L碳酸氫鈉緩沖液或0.5mol/L硼酸緩沖液充分透析;
2.所用的NHSB及待生物素化蛋白質(zhì)之間的分子比按蛋白質(zhì)表面的ε-氨基的密度會有所不同,選擇不當則影響標記的效率,應(yīng)先用幾個不同的分子比來篩選最適條件;
3.用NHSB量過量也是不利的,抗原的結(jié)合位點可能因此被封閉,導(dǎo)致抗體失活;
4.由于抗體的氨基不易接近可能造成生物素化不足,此時可加入去污劑如 Triton x-100, Tween20等;
5.當游離ε-氨基(賴氨酸殘基的氨基)存在于抗體的抗原結(jié)合位點時,或位于酶的催化位點時,生物素化會降低或損傷抗體蛋白的結(jié)合力或活性;
6.生物素還可能與不同的功能基團,如羰基、氨基、巰基、異咪唑基及苯酚基,也可與糖基共價結(jié)合;
7.交聯(lián)反應(yīng)后,應(yīng)充分透析,否則,殘余的生物素會對生物素化抗體與親和素的結(jié)合產(chǎn)生競爭作用;

8.在細胞的熒光標記實驗中,中和親和素的本底低,但由于鏈霉親和素含有少量正電荷,故對某些細胞可導(dǎo)致高本底。

Kelch樣蛋白31抗體
Kelch樣蛋白32抗體
鉀電壓閥門通道混合器相關(guān)亞家族成員5抗體
TGF-β誘導(dǎo)早期應(yīng)答基因1抗體
離子通道蛋白Kv1.3抗體
磷酸化KLF5抗體
磷酸化KLF5抗體
特異性鉀離子通道蛋白抗體
沉默驅(qū)動蛋白KIF4A抗體
ATP敏感鉀離子通道蛋白抗體
KIAA1462蛋白抗體
KIAA1549蛋白抗體
基爾曼氏細小病毒VP1/VP2抗體C端
Kelch樣蛋白20抗體
激肽釋放酶抑制劑抗體
kelch樣蛋白7抗體
TWIK相關(guān)酸敏感鉀離子通道蛋白9抗體
激肽釋放酶6抗體
激肽釋放酶8抗體
血漿激肽釋放酶抗體
磷酸化抑癌蛋白EZH2抗體
組蛋白去甲基化酶JARID1B抗體
硫酸角質(zhì)素抗體
角質(zhì)細胞生長因子調(diào)節(jié)蛋白2抗體
鉀離子通道蛋白G蛋白4抗體
鉀通道多聚體結(jié)構(gòu)域KCTD18抗體
胞質(zhì)接頭蛋白Keap1
舞蹈癥相關(guān)蛋白KALRN抗體
細胞內(nèi)流鉀通道蛋白Kir4.1抗體


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